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產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品簡介：

DiD 染料是親脂性熒光染料家族成員之一，它可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng) DiD 與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細(xì)胞染色，這類染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。四種染料呈現(xiàn)不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC濾光器檢測，可結(jié)合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激發(fā)，具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，特別適合用于標(biāo)記具本底熒光的細(xì)胞和組織。而，DiR在體內(nèi)活體成像或者示蹤中意義非凡，因其所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過細(xì)胞和組織，并且在紅外光范圍內(nèi)，其本底熒光水平很低。

產(chǎn)品特性

CAS NO.：127274-91-3

化學(xué)名：1,1-Dihexadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine   perchlorate

分子式：C61H99ClN2O4

分子量：959.91g/mol

純度：≥95%

Ex/Em：644/665 nm

外觀：紫色或深藍(lán)色固體

溶解性：DMF，DMSO，甲醇

保存條件：-20℃避光保存，一年有效。

使用方法：

1、染色液制備

a.配置DMSO儲存液：儲存液用DMSO或EtOH配置,濃度1～5 mM。

【注】：1未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融，可穩(wěn)定保存6個(gè)月。

必須保證所用溶劑新鮮無水。

b.工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1-5μM的工作液。

【注】：工作液最終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來優(yōu)化。

2、 懸浮細(xì)胞染色

1) 加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2) 37 ℃孵育細(xì)胞 2～20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20 min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

3) 孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5 min。

4) 傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

5) 重復(fù)（3）、（4）步驟兩次以上。

3、貼壁細(xì)胞的染色

1) 將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

2) 從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

3) 在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

4) 37 ℃孵育細(xì)胞 2～20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?0 min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

5) 吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10 min，然后吸干培養(yǎng)基。

4、顯微鏡檢測

1) DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

2) 多色染料的同時(shí)檢測，濾光器按照以下設(shè)定：

DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5、流式細(xì)胞儀的檢測

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。

表1.  DiD，DiO，DiI，DiR，DiS的化學(xué)性質(zhì)

注意事項(xiàng)

熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。

為了您的健康，實(shí)驗(yàn)操作時(shí)請穿實(shí)驗(yàn)服和帶一次性手套。

DiD 染色固定的細(xì)胞或組織樣品時(shí)，樣品宜使用配制在PBS 中的 4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?dǎo)致熒光背景較高